26、清醒小鼠膜片钳与大鼠睡眠稳态的细胞机制研究

清醒小鼠膜片钳与大鼠睡眠稳态的细胞机制研究

1. 引言

大脑皮层活动在多个时间和空间尺度上呈现出持续的自发波动，这些波动与警觉状态、运动、行为以及是否存在感觉刺激紧密相关。在数分钟到数小时的慢时间尺度上，大脑状态会在清醒和睡眠这两种截然不同的状态之间有规律地波动。

传统上，动物和人类的睡眠与清醒状态是通过脑电图（EEG）来研究的。EEG技术的优势在于，通过放置在颅骨或皮层表面的宏观电极记录到的信号，能够代表大规模的皮层活动，并且可以同时从多个皮层区域进行长时间的记录。随着慢性EEG技术的出现，人们可以记录整晚的睡眠情况，并对大脑电活动的各个方面进行广泛分析。重要的是，慢性睡眠EEG记录和分析不仅发现了睡眠由非快速眼动睡眠（NREM）和快速眼动睡眠（REM）两个不同阶段组成，还揭示了睡眠具有稳态调节的特性，即清醒后睡眠EEG慢波活动（SWA，0.5 - 4 Hz）会增加，并在夜间逐渐下降。然而，EEG方法也存在一些局限性，如容积传导、空间分辨率差，以及无法追踪EEG波的起源或其时空动态与特定细胞和网络机制的关系。

细胞内单细胞电生理学部分解决了这些缺点。该技术揭示了皮层神经元活动、EEG波和整体大脑状态之间的关系。具体而言，与清醒和REM睡眠时皮层神经元大部分时间处于去极化状态不同，几乎所有皮层神经元在睡眠期间都会参与慢振荡，包括神经元持续放电的去极化UP状态和沉默的超极化DOWN状态。此外，还发现了细胞内慢振荡与同时记录的EEG慢波之间存在紧密的时间关系。但细胞内记录技术也有显著的局限性，它无法在自由移动的啮齿动物中进行长期稳定的记录，即使在头部固定的动物中，一次也只能记录少数几个细胞。

因此，为了研究睡眠稳态调节的细胞机制，需要一种既能在自由移动、未麻醉的动