科勒照明系统设计（以落射式荧光显微镜为例）

科勒照明系统被广泛应用于显微镜照明中，根据安装方式不同，主要分为反射式和透射式两种，落射式荧光显微镜中采用反射式科勒照明。

科勒照明的本质是光源平面和孔径光阑共轭，视场光阑与照明场共轭，使光源的像与样品平面（即物镜焦面）错开，光源以类平行光的形式照亮样品，而光源的像不会在成像在传感器上。所以科勒照明可以有很多形式，但只要满足共轭要求的光学设计就可以被称作是科勒照明。

科勒照明相比临界照明等简单的照明系统有以下的好处：

1.光源的像不会对样品观察产生干扰；

2.提供更加均匀的光源；

3.可以通过调节视场光阑去控制通过样品平面照明场的大小，孔径光阑调节照明场的明暗。

基本的科勒照明系统

如上图所示，样品左侧为一套基础的科勒照明系统。

首先我们观察红线，代表光线从光源处出发，红线在光源处和孔径光阑处相交，代表这两处光路共轭，所以光源的像会成像在孔径光阑处，之后红线经过聚光镜后形成平行光束，对样品实现均匀照明。

其次观察蓝线，代表从观察处出发的光线，在视场光阑和样品处共轭。

以下是在 ZMAX 软件上模拟的基本科勒照明系统。

详细软件模拟见参考文献中 illumination迷思

如何设计基本的科勒照明系统

在设计系统之前我们需要知道，科勒照明系统仅仅适用于近轴远场。

理想科勒照明系统的整体长度和照明范围仅仅取决于两片凸透镜的焦距和直径，只要两片透镜的焦距和直径确定了，那么为了满足科勒照明的基本原理，透镜间的距离和照明距离也随之确定了。以下有网站可以计算系统的长度（相关网址已放在参考文献中）

上图中的科勒照明系统适合用于最简单的透射式科勒照明系统，常见的背照式显微镜都可以使用这种设计。

落射式荧光显微镜的科勒照明系统

首先我们可以观察落射式显微镜光路图。

与传统透射式显微镜不同，显微镜的物镜参与到了照明的过程，我们可以简单的理解为，物镜代替了简单科勒系统中第二片透镜的位置。（在爱特蒙特和徕卡光学的手册中均提到过使用物镜代替凸透镜的信息，详细可以去查询相关手册）

我们以 100x 显微镜物镜举例（焦距为 0.2mm），使用上述网址模拟

我们会发现由于显微镜物镜极短的焦距，导致整体光路非常的长。所以为了简化光路，我们引入转移透镜（transfer lens），来将孔径光阑的像精准中继到物镜后焦面。

经过调整后的zmax仿真图像入下图所示

右侧的透镜组为显微镜物镜模拟，左数第二片透镜为转移透镜。

通过这样的设计后，我们可以得到较短的光路，且实现物镜产生平行的科勒照明光。

至此，我们得到了落射式荧光显微镜科勒照明的基本光路图。

参考文献

https://zhuanlan.zhihu.com/p/269197717

https://www.edmundoptics.cn/knowledge-center/tech-tools/koehler-illumination/

本文主要是对知乎法海老师文章的重新思考和不同理解，感谢法海老师的提供的zmax建模文件

最后附上 nikon100x 物镜 zmax 模型，有兴趣的朋友可以拿来练手

通过网盘分享的文件：Nikon_1p4NA_100x_US6519092B2_Embodiment_2_v2.zmx
链接: https://pan.baidu.com/s/1nAsnPq5uv9T-PidPrYZs4A?pwd=8uac 提取码: 8uac